« Technologie/Matériaux/Matériaux biocompatibles/Le Rein, site d’implantation en Biocompatibilité » : différence entre les versions

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== Suites opératoires ==
 
Tous les animaux ont survécu plusieurs semaines voire des mois jusqu'aux dates prévues pour leurs sacrifices, ils ont gardé tous leurs caractère, la cicatrisation est parfaite, après 20 jours seule la taille des poils justifieatteste que l'animal a été opéré.
 
== EvolutionÉvolution du poids des animaux ==
 
La croissance pondérale moyenne, d'un jeune rat albinos, est de 44% en 12 jours, soit une prise de 53 grammes pour un rat d'un poids initial de 120 grammes ; cette augmentation de poids rapide chez le jeune devient lente chez l'adulte. Au cours de nos expérimentations, nous avons constaté que d'une manière générale il y a une augmentation du poids des animaux sauf, pour un animal qui a gardé son poids initial et pour deux sujets qui ont perdu du poids, ces deux derniers ont fait des syncopes au cours de l'intervention.
 
La croissance pondérale moyenne, d'un jeune rat albinos, est de 44% en 12 jours, soit une prise de 53 grammes pour un rat d'un poids initial de 120 grammes; cette augmentation de poids rapide chez le jeune devient lente chez l'adulte. Au cours de nos expérimentations, nous avons constaté que d'une manière générale il y a une augmentation du poids des animaux sauf, pour un animal qui a gardé son poids initial et pour deux sujets qui ont perdu du poids, ces deux derniers ont fait des syncopes au cours de l'intervention.
Le contrôle et la surveillance régulière des animaux a permis de relever l’augmentation de leurs poids :
- les deux premiers mois, de 5 à 30 grammes ;
- le troisième mois, de 13 à 40 grammes. Un seul animal a gardé le poids initial, les deux rats qui ont fait des syncopes ont perdu 12 à 22 grammes ;
- dans le sixième mois, de 30 à 75 grammes.
 
L'évolution du poids des animaux relevée au cours de notre expérimentation correspond aux statistiques du laboratoire.
L'évolution du poids des animaux relevée au cours de notre expérimentation correspond aux statistiques du laboratoire. Nous pouvons donc constater que l'implantation sous la capsule rénale du rat n'a pas perturbé la croissance des animaux.
 
== Observations macroscopiques ==
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== Résultats histologiques ==
 
L'observation des préparations au microscope est une véritable lecture "« à livre ouvert" » faite à faible grossissement pour se rendre compte de la disposition relative des diverses structures. Le fort grossissement, employé secondairement, permet l'étude de points particuliers intéressant les "« zones frontières" » entre la capsule et le parenchyme rénal, la capsule et l'implant, et l'implant et le parenchyme rénalerénal.
 
L'ensemble des coupes a permis un examen microscopique des différentes réactions cellulaires ou fibreuses présentes au voisinage immédiat et à distance du site d'implantation. Les lames ont été observées dans l'ordre chronologique et groupées par lots correspondant aux jours du prélèvement.
 
IV.1=== Après 28 jours ===
 
Le tissu rénal a un aspect histologique normal, aucune altération n'a été observée au niveau du tissu épithélial avoisinant la zone d'implantation ou à distance.
 
Le site est circonscrit par un tissu granulomateux bien organisé, riche en fibroblastes, en vaisseaux néoformés, avec prolifération cellulaire autour du site d'implantation ..
 
Figure 4 : Grossissement 400. Nous remarquons la présence d'une réaction conjonctive importante (CJ) et une invasion cellulaire (IC). Les structures épithéliales du parenchyme rénal sont intactes.
Le site est circonscrit par un tissu granulomateux bien organisé, riche en fibroblastes, en vaisseaux néoformés, avec prolifération cellulaire autour du site d'implantation ..
 
IV.2=== Après 64 jours ===
Figure 4: Grossissement 400. Nous remarquons la présence d'une réaction conjonctive importante (CJ) et une invasion cellulaire (IC). Les structures épithéliales du parenchyme rénal sont intactes.
 
On note la présence de fragments de l'implant au voisinage immédiat du site d'implantation. Le tissu granulomateux est mieux organisé. On note le nombre restreint de cellules inflammatoires chroniques mononucléées.
 
IV.2 Après 64 jours
 
On note la présence de fragments de l'implant au voisinage immédiat du site d'implantation.
 
Le tissu granulomateux est mieux organisé. On note le nombre restreint de cellules inflammatoires chroniques mononucléées.
 
Les différentes observations ne révèlent en aucun cas un enkystement, au contraire on observe des plages de tissus qui témoignent d'une excellente cicatrisation. L'observation des tissus situés à distance de l'implant n'a rien révélé d'anormal.
 
Figure 5 : Grossissement 400. On note un épaississement du tissu conjonctif, une invasion cellulaire et fibrillaire et la présence de fragments de l'implant.
 
 
IV.3=== Après 84 jours ===
 
La question qui nous préoccupe le plus, est de savoir si au bout de la douzième semaine, le tissu granulomateux et les cellules inflammatoires disséminées vont disparaître, pour laisser place à un tissu parfaitement cicatrisé comme le rapportent les travaux de nombreux auteurs (7).
 
Il est intéressant de constater qu’après trois mois d'implantation le diamètre du site l a diminué, diminutioncette quidiminution ne peut être liée qu'au caractère biorésorbable du phosphate tricalcique.
 
Au voisinage immédiat de l'implant la réaction conjonctive est beaucoup plus importante que pour les 2 premiers mois. A distance de l’implant les différentes structures rénales sont intactes, toutes ces observations témoignent que l'implant est parfaitement toléré.
 
Figure 6 : Grossissement 400. On note une réaction cellulaire avec présence de fibres collagènes orientées dans tous les sens qui ont tendance à s'épaissir. Il n’y a pas de signes de cytooxicité à tous les niveaux du tissu rénal. Le tissu conjonctif fibreux est dépourvu de cellules inflammatoires. Le parenchyme rénal est intact.
 
IV.4=== Après 168 jours ===
 
On met en évidence une réaction fibreuse importante tout autour du lieu d’implantation. La présence de cette formation fibreuse est vraisemblablement liée aux propriétés d'induction du phosphate tricalcique. La cicatrisation des tissus est parfaite et le site est bien stabilisé.
 
L'aspect déchiqueté de la périphérie du site d'implantation (dû à l'élimination de la bille avant la coupe) prouve l'adhésion du matériau aux tissus.
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Les plages de tissu cicatriciel diffèrent totalement de l'aspect des tissus observés les premiers mois. Le parenchyme rénal avoisinant ou à distance du site d'implantation ne présente aucun signe anormale d'inflammation, on note l'état normal des tubules rénaux et des corpuscules de Malpighi.
 
Figure 7 : Grossissement 400. Détail de la figure précédente, on note la présence d'une structure fibreuse épaisse (SFE).
 
Figure 8 : Grossissement 400. Après six mois, comme pour les mois précédents, à distance du site d'implantation les structures épithéliales du parenchyme rénal et les corpuscules de Malpighi sont restés intacts.
 
== Interprétation des résultats histologiques ==
 
Les 32 rats opérés sont restés vivants alors que le pourcentage de perte des animaux dans le laboratoire est de 2 à 5 %.
 
Il nous faut reconnaître que les conditions idéales d'intervention sont rarement réunies dans une expérimentation animale. Nous avons échappé aux servitudes qui en découlent et restons très satisfaits des résultats positifs obtenus.
 
La cicatrisation de l'incision est rapide pour tous les animaux opérés, seule la taille des poils au niveau du flanc gauche justifieqtteste que les rats ont été opérés.
 
L'évolution du poids des animaux correspond aux statistiques du laboratoire, la légère diminution observée pour deux rats peut être attribuée au fait que ces deux animaux ont fait des syncopes au cours des interventions, l'augmentation lente pour les autres animaux est normale car nous avons utilisé des rats adultes.
 
L'aspect normal des organes vitaux au voisinage du rein jointet auxles observations déjà citées, justifientprouvent que la technique expérimentale utilisée est menée dans des conditions optimales.
 
La présence de particules de phosphate tricalcique au niveau du site d'implantation témoigne du caractère bio-réactif de ce matériau sous la capsule rénale. La diminution du diamètre des billes en phosphate tricalcique confirme les résultats observés par d’autres auteurs (en milieu biologique ce matériau subit une dissolution). Nous regrettons de ne pas avoir utilisé une poudre à granulométrie grossière et un mode d'usinage qui met en oeuvreœuvre un produit de liaison calcinable à basse température.
 
Dans les premières semaines qui suivent l'intervention, la présence de cellules inflammatoires disséminées, s'inscrit dans les suites opératoires normales, à l'évidence leur nombre diminue dans le temps pour devenir nul à 12 semaines (7). Il est donc réconfortant de constater, que même avec des réactions inflammatoires résiduelles au bout des premières semaines, il se produit des formations collagéniques intéressantes qui apportent la preuve du caractère régressif de l'inflammation à ce stade.
 
L'aspect déchiqueté des sites d'implantation associé à l'irrégularité des frontières qui rappelle un aspect en carte de géographie est une des preuves qu'il y a eu réaction entre le biomatériau testé et le site receveur.
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La mise en évidence de cellules conjonctives et de plages de tissus stabilisés est vraisemblablement liée aux propriétés d'induction cellulaire que possède le phosphate tricalcique.
 
L'aspect déchiré de la périphérie des sites d'implantation témoigne de l'adhésion à l'interface matériau-tissus et du début de colonisation des vacuités, vacuités résultant de la dissolution de particules du phosphate tricalcique, par les cellules conjonctives néoformées.
 
Dans tous les cas l'aspect du tissu rénal est resté normal aucune altération n'a été mise en évidence au niveau des tissus épithéliaux et conjonctifs au voisinage immédiat ou à distance du site d'implantation.
 
Dans tous les cas l'aspect du tissu rénal est resté normalnormalm aucune altération n'a été mise en évidence au niveau des tissus épithéliaux et conjonctifs au voisinage immédiat ou à distance du site d'implantation.
 
== Analyse des implants après expérimentation ==
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Les échantillons de phosphate tricalcique ont été extirpés après 1,2,3 et 6 mois d'implantation, observés et analysés au microscope électronique à balayage (JEOL). La métallisation de la surface des échantillons a été assurée par un dépôt de carbone. La caractérisation au microscope électronique à balayage a été effectuée sur des échantillons fracturés et d'autres non fracturés.
 
La microstructure interne du matériau fracturé rappelle singulièrement celle du départ (existence de pores entre les grains) et semble indiquer que le cœur de l'échantillon n'a pas été modifié même après 6 mois d'implantation. Aucun changement n'a été révélé dans la structure interne de la bille (40).
 
Les micrographies de la surface des échantillons non fracturés sont extrêmement complexes, toutes les billes sont recouvertes par du tissu rénalrénalm ce qui rend difficile l'analyse de la structure de surface de la billebillem sauf par endroitendroits où nous n'avons pas rencontré de différence significative de la structure externe après implantation par rapport à celle du départ.
 
L'évaluation de la concentration en éléments calcium et phosphore dans un échantillon après six mois d'implantation a été effectuée par la microsonde EDAX couplée au microscopique électronique à balayage. La microanalyse permet d’évaluer qualitativement et même quantitativement les éléments constitutifs du matériau, elle complète toujours l'observation au microscope électronique à balayage et permet d'obtenir des micrographies qui mettent en évidence les raies quicqrqct2ristiaues correspondent auxdes différents éléments présents élémentsdans le matériau présentsanalysé. dansParfois une raie leest masquée par une autre, la lecture de la micrographie devient alors difficile.
matériau analysé. Parfois une raie est masquée par une autre, la lecture de la micrographie devient alors difficile.
 
L’analyse des éléments calcium et phosphore a été effectuée sur des échantillons enrobés dans la résine. Cinq zones différentes de dimensions 40 micromètres x 30 micromètres ont été analysées au cœur de l'échantillon et à sa surface .
 
Une variation très nette de l'intensité de la raie KK de l'élément calcium est observée lorsqu'on passe de la surface de l'échantillon au cœur de celui-ci. Le rapport des intensités des raies KK passe de 6,30 (cœur de l'échantillon) à 4,5 (surface) avec une bonne reproductibilité. Ces valeurs, bienBien qu'elles ne correspondent pas au rapport atomique Ca/P, ces valeurs sont toutefois significatives d'une résorption des ions Ca2+ par les tissus environnants (37).
 
= Discussion =