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« Technologie/Matériaux/Matériaux biocompatibles/Le Rein, site d’implantation en Biocompatibilité » : différence entre les versions

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Chaque prélèvement après sacrifice bénéficie d'un examen macroscopique minutieux. Cet examen intéresse également les billes en phosphate tricalcique.
 
III.4.1==== Préparation des reins ====
 
Pour l'examen au microscope optique, tous les reins sont traités de façon identique.
 
III.4.1.1==== Fixation ====
 
L'histologie permet d'étudier la morphologie des tissus vivants. Donc le premier problème à résoudre après le prélèvement des tissus est leur fixation. Cette manipulation comprend la mort du tissu et l’immobilisation de ses structures et ses composantes dans un état semblable à l'état vivant.
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Après fixation dans le liquide de Bouin, une coupe sagittale du rein le divise en 2 parties, une des 2 parties comporte l'implant en phosphate tricalcique.
 
III.4.1.2==== Déshydratation ====
 
Les prélèvements sont déshydratés à l'aide d'alcools, éclaircis par le toluène et imprégnés dans la paraffine.
 
III.4.1.3==== Enrobage ====
 
Le tissu rénal imprégné de paraffine est inclus dans un bloc de paraffine, le bloc est ensuite sectionné, en coupe d’une épaisseur, au moyen d’un microtome.
 
 
III.4.1.4==== Coupes au microtome ====
 
Nous avons utilisé le microtome rotatif de Minot. Le rasoir est fixe, et la pièce se déplace verticalement pendant la réalisation des coupes. Sous l'action de la chaleur produite par le frottement avec le rasoir, la paraffine fond légèrement, ce qui permet d'avoir une adhérence des coupes les unes aux autres quipour formentformer un ruban, nous obtenons ainsi un grand nombre de coupes à partir d'un même bloc.
 
==== Étalement des coupes ====
III.4.1.5 Etalement des Coupes
Les tissus inclus dans la paraffine sont trèsfortement comprimés pendant la coupe ; afin d'atténuer cette compression on procède à l'étalement des coupes. On utilise une plaque chauffante dont la température est à 30 °C, sur laquelle on dépose les lames que l'on recouvre de liquide d'étalement à base d'eau distillée et d'albumine. On y place les coupes, puis on les étale, les plis qui demeurent sont enlevés à l'aide d'aiguilles à dissection. A la fin de l'opération on absorbe l'excès de liquide avec un papier buvard et enfin on laisse les lames sécher sur la platine.
On utilise une plaque chauffante dont la température est à 30°C, sur laquelle on dépose les lames que l'on recouvre de liquide d'étalement à base d'eau distillée et d'albumine. On y place les coupes, puis on les étale, les plis qui demeurent sont enlevés à l'aide d'aiguilles à dissection. A la fin de l'opération on absorbe l'excès de liquide avec un papier buvard et enfin on laisse les lames sécher sur la platine.
 
III.4.1.6==== Coloration ====▼
 
On procède d'abord au déparaffinage et à l'hydratation des coupes, ; pour que les colorants puissent pénétrer dans le tissu, il faut en retirer la paraffine et l’imprégner d'eau. On commence d'abord par passer les coupes dans des bains de toluène pour éliminer la paraffine. La deuxième étape consiste à commencer par des bains de 5 minutes à 10 minutes dans l'éthanol à différents degrés suivis d'un traitement de 5 minutes à 10 minutes dans l'eau.▼
 
La coloration permet de mettre en évidence les noyaux, le cytoplasme et les fibres de collagène ; elle permet ainsi de se faire une idée de la topographie générale du tissu. Le temps nécessaire à la coloration varie énormément d'une méthode à l'autre. Dans cette étude nous avons utilisé deux techniques de coloration : le trichrome de Goldner et le trichrome de Masson.▼
▲III.4.1.6 Coloration
 
Ces deux méthodes dérivent de la technique du trichrome de Mallory, elles reposent sur les différences de perméabilité qui existent entre les fibres de collagène et les autres éléments acidophiles du tissu. Elles comprennent l'utilisation, en séquence, de fuchsine acide, d'acide phosphomolybdique et du bleu d'aniline (ou vert lumière) et elles permettent la coloration : des noyaux, chromatine et nucléoles en bleu foncé à noir, du cytoplasme en rouge, des globules rouges et granulations éosinophiles en rouge, du collagène en bleu (bleu d'aniline) ou en vert (vert lumière).▼
▲On procède d'abord au déparaffinage et à l'hydratation des coupes, pour que les colorants puissent pénétrer dans le tissu, il faut en retirer la paraffine et l’imprégner d'eau. On commence d'abord par passer les coupes dans des bains de toluène pour éliminer la paraffine. La deuxième étape consiste à commencer par des bains de 5 minutes à 10 minutes dans l'éthanol à différents degrés suivis d'un traitement de 5 minutes à 10 minutes dans l'eau.
La coloration permet de mettre en évidence les noyaux, le cytoplasme et les fibres de collagène; elle permet ainsi de se faire une idée de la topographie générale du tissu.
▲Le temps nécessaire à la coloration varie énormément d'une méthode à l'autre. Dans cette étude nous avons utilisé deux techniques de coloration: le trichrome de Goldner et le trichrome de Masson.
▲Ces deux méthodes dérivent de la technique du trichrome de Mallory, elles reposent sur les différences de perméabilité qui existent entre les fibres de collagène et les autres éléments acidophiles du tissu. Elles comprennent l'utilisation, en séquence, de fuchsine acide, d'acide phosphomolybdique et du bleu d'aniline (ou vert lumière) et elles permettent la coloration: des noyaux, chromatine et nucléoles en bleu foncé à noir, du cytoplasme en rouge, des globules rouges et granulations éosinophiles en rouge, du collagène en bleu (bleu d'aniline) ou en vert (vert lumière).
 
III.4.1.7==== Montage ====
 
Les coupes sont montées de façon classique. Les lames sont groupées par lots qui correspondent aux jours des prélèvements et sont observées au microscope optique muni d'un appareil photographique (Reichert-Zetopan-Microstar IV).
 
III.4.2=== Préparation des billes pour l’analyse ===
 
Pour l'analyse des billes ende phosphate tricalcique, nous procédons à la métallisation de la surface par un dépôt de carbone pour l'étude au microscope électronique à balayage. Pour l'analyse par microsonde les billes sont incluses dans la résine.
 
= Résultats =
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